1. Obxectivo: Este procedemento ten como obxectivo proporcionar un procedemento estandarizado para operacións asépticas e protección de salas estériles.
2. Ámbito de aplicación: laboratorio de probas biolóxicas
3. Persoa responsable: Supervisor de control de calidade
4. Definición: Ningunha
5. Precaucións de seguridade
Realizar operacións estritamente asépticas para evitar a contaminación microbiana; os operadores deben apagar a lámpada UV antes de entrar na sala estéril.
6. Procedementos
6.1. A sala estéril debe estar equipada cun quirófano estéril e unha sala de almacenamento. A limpeza da sala de operacións estéril debe alcanzar a clase 10000. A temperatura interior debe manterse entre 20 e 24 °C e a humidade entre o 45 e o 60 %. A limpeza da mesa de traballo limpa debe alcanzar a clase 100.
6.2. A sala estéril debe manterse limpa e está estritamente prohibido acumular residuos para evitar a contaminación.
6.3. Evitar estritamente a contaminación de todos os equipos de esterilización e medios de cultivo. Aqueles que estean contaminados deben deixar de usalos.
6.4. A sala estéril debe estar equipada con desinfectantes de concentración de traballo, como unha solución de cresol ao 5 %, alcol ao 70 %, solución de clormetionina ao 0,1 %, etc.
6.5. A sala estéril debe esterilizarse e limparse regularmente cun desinfectante axeitado para garantir que a limpeza da sala estéril cumpra os requisitos.
6.6. Todos os instrumentos, ferramentas, pratos e outros artigos que sexa necesario levar á sala estéril deben estar ben envoltos e esterilizados mediante métodos axeitados.
6.7. Antes de entrar na sala estéril, o persoal debe lavarse as mans con xabón ou desinfectante e, a continuación, poñerse roupa de traballo especial, calzado, gorro, máscara e luvas na sala de protección (ou limpar de novo as mans con etanol ao 70 %) antes de entrar na sala estéril. Realizar as operacións na cámara bacteriana.
6.8. Antes de usar unha sala estéril, a lámpada ultravioleta da sala estéril debe estar acendida para a irradiación e a esterilización durante máis de 30 minutos e, ao mesmo tempo, a mesa de limpeza debe estar acendida para o soprado de aire. Unha vez finalizada a operación, a sala estéril debe limparse a tempo e, a continuación, esterilizarse con luz ultravioleta durante 20 minutos.
6.9. Antes da inspección, a embalaxe exterior da mostra de proba debe manterse intacta e non se debe abrir para evitar a contaminación. Antes da inspección, use bólas de algodón con alcohol ao 70 % para desinfectar a superficie exterior.
6.10. Durante cada operación, débese realizar un control negativo para comprobar a fiabilidade do funcionamento aséptico.
6.11. Ao absorber líquido bacteriano, debes usar unha bóla de succión para absorbelo. Non toques a palla directamente coa boca.
6.12. A agulla de inoculación debe esterilizarse con chama antes e despois de cada uso. Despois de arrefriar, pódese inocular o cultivo.
6.13. As pallas, os tubos de ensaio, as placas de Petri e outros utensilios que conteñan líquido bacteriano deben mergullarse nun balde de esterilización que conteña unha solución Lysol ao 5 % para a súa desinfección e retirarse e enxaugarse despois de 24 horas.
6.14. Se se derrama líquido bacteriano sobre a mesa ou o chan, débese verter inmediatamente unha solución de ácido carbólico ao 5 % ou Lysol ao 3 % sobre a zona contaminada durante polo menos 30 minutos antes de tratala. Cando a roupa de traballo e os sombreiros estean contaminados con líquido bacteriano, débense quitar inmediatamente e lavalos despois da esterilización con vapor a alta presión.
6.15. Todos os artigos que conteñan bacterias vivas deben desinfectarse antes de enxaugalos baixo a billa. Está estritamente prohibido contaminar as augas residuais.
6.16. O número de colonias na sala estéril debe comprobarse mensualmente. Coa mesa limpa aberta, coller varias placas de Petri estériles cun diámetro interior de 90 mm e inxectar asépticamente uns 15 ml de medio de cultivo de ágar nutritivo que foi fundido e arrefriado a uns 45 °C. Despois da solidificación, colocar boca abaixo a 30 a 35 °C. Incubar durante 48 horas nunha incubadora de 3 °C. Despois de comprobar a esterilidade, coller de 3 a 5 placas e colocalas á esquerda, no medio e na dereita da posición de traballo. Despois de abrir a tapa e expoñelas durante 30 minutos, colocar boca abaixo nunha incubadora de 30 a 35 °C durante 48 horas e retiralas. Examinar. O número medio de bacterias diversas na placa nunha zona limpa de clase 100 non debe superar 1 colonia, e o número medio nunha sala limpa de clase 10000 non debe superar 3 colonias. Se se supera o límite, a sala estéril debe desinfectarse completamente ata que as inspeccións repetidas cumpran os requisitos.
7. Consulte o capítulo (Método de inspección de esterilidade) en "Métodos de inspección de hixiene de medicamentos" e "Prácticas operativas estándar de China para a inspección de medicamentos".
8. Departamento de Distribución: Departamento de Xestión da Calidade
Guía técnica para salas limpas:
Despois de obter un ambiente e materiais estériles, debemos manter un estado estéril para poder estudar un microorganismo específico coñecido ou utilizar as súas funcións. Se non, varios microorganismos do exterior poden mesturarse facilmente. O fenómeno da mestura de microorganismos irrelevantes do exterior chámase bacterias contaminantes en microbioloxía. A prevención da contaminación é unha técnica fundamental no traballo microbiolóxico. A esterilización completa, por unha banda, e a prevención da contaminación, por outra, son dous aspectos da técnica aséptica. Ademais, debemos evitar que os microorganismos en estudo, especialmente os microorganismos patóxenos ou os microorganismos modificados xeneticamente que non existen na natureza, escapen dos nosos recipientes experimentais ao ambiente externo. Para estes fins, en microbioloxía, existen moitas medidas.
Unha sala estéril adoita ser unha sala pequena especialmente preparada nun laboratorio de microbioloxía. Pódese construír con láminas e vidro. A área non debe ser demasiado grande, duns 4-5 metros cadrados, e a altura debe ser duns 2,5 metros. Débese preparar unha sala tampón fóra da sala estéril. A porta da sala tampón e a porta da sala estéril non deben estar orientadas na mesma dirección para evitar que o fluxo de aire introduza bacterias diversas. Tanto a sala estéril como a sala tampón deben ser herméticas. O equipo de ventilación interior debe ter dispositivos de filtración de aire. O chan e as paredes da sala estéril deben ser lisos, difíciles de acumular sucidade e fáciles de limpar. A superficie de traballo debe estar nivelada. Tanto a sala estéril como a sala tampón están equipadas con luces ultravioleta. As luces ultravioleta da sala estéril están a 1 metro de distancia da superficie de traballo. O persoal que entre na sala estéril debe levar roupa e gorros esterilizados.
Actualmente, as salas estériles existen principalmente nas fábricas de microbioloxía, mentres que os laboratorios xerais usan bancos de limpeza. A función principal do banco de limpeza é usar un dispositivo de fluxo de aire laminar para eliminar varios po diminutos, incluídos os microorganismos, na superficie de traballo. O dispositivo eléctrico permite que o aire pase a través do filtro HEPA e logo entre na superficie de traballo, de xeito que a superficie de traballo sempre se manteña baixo o control do fluxo de aire estéril. Ademais, hai unha cortina de aire de alta velocidade no lateral próximo ao exterior para evitar a entrada de aire bacteriano externo.
En lugares con condicións difíciles, tamén se poden usar caixas estériles de madeira en lugar de bancos limpos. A caixa estéril ten unha estrutura simple e é fácil de mover. Hai dous orificios na parte dianteira da caixa, que se bloquean con portas de empurrar e tirar cando non está en funcionamento. Podes estender os brazos cara a dentro durante o funcionamento. A parte superior da parte dianteira está equipada con vidro para facilitar o funcionamento interno. Hai unha lámpada ultravioleta dentro da caixa e os utensilios e as bacterias pódense introducir a través dunha pequena porta lateral.
As técnicas operativas asépticas non só desempeñan un papel fundamental na investigación e aplicacións microbiolóxicas, senón que tamén se empregan amplamente en moitas biotecnoloxías. Por exemplo, a tecnoloxía transxénica, a tecnoloxía de anticorpos monoclonais, etc.
Data de publicación: 06-03-2024