1. Obxecto: este procedemento ten por obxecto proporcionar un procedemento normalizado para as operacións asépticas e a protección de cuartos estériles.
2. Ámbito de aplicación: laboratorio de ensaios biolóxicos
3. Persoa responsable: Supervisor de control de calidade
4.Definición: Ningún
5. Precaucións de seguridade
Realizar estrictamente operacións asépticas para evitar a contaminación microbiana; os operadores deben apagar a lámpada UV antes de entrar na sala estéril.
6.Procedementos
6.1. A sala estéril debe estar equipada cunha sala de operacións estéril e unha sala de protección. A limpeza da sala de operacións estéril debe alcanzar a clase 10000. A temperatura interior debe manterse a 20-24 °C e a humidade debe manterse nun 45-60%. A limpeza do banco limpo debe alcanzar a clase 100.
6.2. A sala estéril debe manterse limpa e está terminantemente prohibido acumular restos para evitar a contaminación.
6.3. Evitar estrictamente a contaminación de todos os equipos de esterilización e medios de cultivo. Os que están contaminados deben deixar de usalos.
6.4. A sala estéril debe estar equipada con desinfectantes de concentración de traballo, como solución de cresol ao 5%, alcohol ao 70%, solución de clormetionina ao 0,1%, etc.
6.5. A sala estéril debe esterilizarse e limparse regularmente cun desinfectante adecuado para garantir que a limpeza da sala estéril cumpra os requisitos.
6.6. Todos os instrumentos, instrumentos, pratos e outros artigos que se deben levar á sala estéril deben estar ben envoltos e esterilizados mediante métodos apropiados.
6.7. Antes de entrar na sala estéril, o persoal debe lavarse as mans con xabón ou desinfectante, e despois cambiarse con roupa de traballo, zapatos, gorros, máscaras e luvas especiais na sala de amortiguación (ou limparse as mans de novo con etanol ao 70%) antes de entrar na sala estéril. Realiza operacións en cámara bacteriana.
6.8. Antes de usar a sala estéril, a lámpada ultravioleta na sala estéril debe estar acendida para irradiar e esterilizar durante máis de 30 minutos, e o banco limpo debe estar acendido para que o aire sople ao mesmo tempo. Despois de completar a operación, a sala estéril debe ser limpa a tempo e despois esterilizada por luz ultravioleta durante 20 minutos.
6.9. Antes da inspección, o embalaxe exterior da mostra de proba debe manterse intacto e non debe abrirse para evitar a contaminación. Antes da inspección, use boliñas de algodón con 70% de alcohol para desinfectar a superficie exterior.
6.10. Durante cada operación, débese facer un control negativo para comprobar a fiabilidade da operación aséptica.
6.11. Ao absorber líquido bacteriano, debes usar unha bola de succión para absorbelo. Non toque a palla directamente coa boca.
6.12. A agulla de inoculación debe esterilizarse á chama antes e despois de cada uso. Despois do arrefriamento, o cultivo pódese inocular.
6.13. As pallas, os tubos de ensaio, as placas de Petri e outros utensilios que conteñan líquido bacteriano deben empaparse nun balde de esterilización que conteña solución de lisol ao 5% para a desinfección, e retirarse e lavar despois de 24 horas.
6.14. Se hai líquido bacteriano derramado na mesa ou no chan, debes verter inmediatamente unha solución de ácido carbólico ao 5% ou un 3% de lisol na zona contaminada durante polo menos 30 minutos antes de tratala. Cando a roupa de traballo e os sombreiros están contaminados con fluído bacteriano, débense quitar inmediatamente e lavar despois da esterilización con vapor a alta presión.
6.15. Todos os artigos que conteñan bacterias vivas deben ser desinfectados antes de ser enxágües baixo a billa. Queda terminantemente prohibido contaminar o sumidoiro.
6.16. O número de colonias na sala estéril debe comprobarse mensualmente. Co banco limpo aberto, tome un número de placas de Petri estériles cun diámetro interior de 90 mm e inxecte de forma aséptica uns 15 ml de medio de cultivo de agar nutritivo que se fundiu e arrefriou a uns 45 °C. Despois da solidificación, colócao boca abaixo a 30 a 35 Incubar durante 48 horas nunha incubadora ℃. Despois de probar a esterilidade, colle de 3 a 5 placas e colócaas á esquerda, no medio e á dereita da posición de traballo. Despois de abrir a tapa e expoñelas durante 30 minutos, colócaas boca abaixo nunha incubadora de 30 a 35 °C durante 48 horas e sácaas. examinar. O número medio de bacterias varias na placa nunha área limpa de clase 100 non debe exceder 1 colonia e o número medio nunha sala limpa de clase 10000 non debe exceder de 3 colonias. Se se supera o límite, a sala estéril debe desinfectarse completamente ata que as inspeccións repetidas cumpran os requisitos.
7. Consulte o capítulo (Método de inspección de esterilidade) en "Métodos de inspección hixiénica de drogas" e "Prácticas operativas estándar de China para a inspección de drogas".
8. Departamento de Distribución: Departamento de Xestión da Calidade
Orientación técnica da sala limpa:
Despois de obter un ambiente estéril e materiais estériles, debemos manter un estado estéril para estudar un microorganismo específico coñecido ou utilizar as súas funcións. En caso contrario, varios microorganismos do exterior poden mesturarse facilmente. O fenómeno da mestura de microorganismos irrelevantes do exterior chámase bacterias contaminantes en microbioloxía. A prevención da contaminación é unha técnica crítica no traballo microbiolóxico. A esterilización completa, por unha banda, e a prevención da contaminación, por outra, son dous aspectos da técnica aséptica. Ademais, debemos evitar que os microorganismos en estudo, especialmente os microorganismos patóxenos ou os microorganismos de enxeñaría xenética que non existen na natureza, escapen dos nosos recipientes experimentais ao medio externo. Para estes efectos, en microbioloxía, hai moitas medidas.
A sala estéril adoita ser unha pequena sala especialmente configurada no laboratorio de microbioloxía. Pódese construír con follas e vidro. A área non debe ser demasiado grande, duns 4-5 metros cadrados, e a altura debe ser duns 2,5 metros. Débese instalar unha sala de protección fóra da sala estéril. A porta da sala de amortiguación e a porta da sala estéril non deben mirar na mesma dirección para evitar que o fluxo de aire introduza bacterias diversas. Tanto a sala estéril como a sala tampón deben ser herméticas. Os equipos de ventilación en interiores deberán contar con dispositivos de filtración de aire. O chan e as paredes da sala estéril deben ser lisos, difíciles de albergar a sucidade e fáciles de limpar. A superficie de traballo debe estar nivelada. Tanto a sala estéril como a sala tampón están equipadas con luces ultravioleta. As luces ultravioleta na sala estéril están a 1 metro de distancia da superficie de traballo. O persoal que entre na sala estéril debe levar roupa e sombreiros esterilizados.
Actualmente, as salas estériles existen principalmente nas fábricas de microbioloxía, mentres que os laboratorios xerais usan bancos limpos. A función principal do banco limpo é utilizar un dispositivo de fluxo de aire laminar para eliminar varios pequenos po, incluíndo microorganismos na superficie de traballo. O dispositivo eléctrico permite que o aire pase a través do filtro hepa e despois entre na superficie de traballo, de xeito que a superficie de traballo se mantén sempre baixo o control do aire estéril que flúe. Ademais, hai unha cortina de aire de alta velocidade no lateral próximo ao exterior para evitar a entrada de aire bacteriano externo.
En lugares con condicións difíciles, tamén se poden usar caixas estériles de madeira en lugar de banco limpo. A caixa estéril ten unha estrutura sinxela e é fácil de mover. Hai dous buratos na parte frontal da caixa, que están bloqueados por portas push-pull cando non están en funcionamento. Podes estender os brazos durante a operación. A parte superior da fronte está equipada con vidro para facilitar o funcionamento interno. Dentro da caixa hai unha lámpada ultravioleta, e os utensilios e as bacterias pódense poñer a través dunha pequena porta lateral.
As técnicas operativas asépticas actualmente non só xogan un papel fundamental na investigación e aplicacións microbiolóxicas, senón que tamén son moi utilizadas en moitas biotecnoloxías. Por exemplo, tecnoloxía transxénica, tecnoloxía de anticorpos monoclonais, etc.
Hora de publicación: 06-mar-2024